지시약 BTB(Bromothymol Blue)를 이용한 큰느타리버섯균사 활력 검정법

큰느타리버섯균사 연구개발자 및 공동개발자 연락처 테이블
  소속기관 성명 전화 및 e-mail
연구개발자 경기도농업기술원
(버섯연구소)		 이윤혜 031)229-6125
pdyma@hanmail.net
공동개발자 경기도농업기술원
(버섯연구소)		 장명준 031)229-6123
경기도농업기술원
(버섯연구소)		 하태문 031)229-6121
경기도농업기술원
(버섯연구소)		 주영철 031)229-6120

연구성적(’06, 경기도원) :
가. 활력검정배지의 BTB농도별 탈색율 및 색차

BTB농도별 보존온도, 탈색율, 색차를 나타낸 표
BTB농도(ppm) 25 100 200
보존온도(℃) 무보존 35 무보존 35 무보존 35
탈색율(%) 48.6 30.2 55.2 36.3 44.2 32.7
색 차(ΔE) 22.8 6.5 80.7 19.9 17.9 9.3
※보존기간 : 30일, 반응온도 : 25℃, 배양기간 : 3일, 접종량 : 2.4㎠/10㎖
탈색율(%)=〔(반응전 흡광도-반응후 흡광도)/반응전 흡광도 × 100
색차(ΔE)=√ΔL(백색도변화)2 + Δa(적색도변화)2 + Δb(황색도변화)2

나. 활력검정배지의 균사체접종량별 탈색율 및 색차

균사체접종량별 보존온도, 탈색율, 색차를 나타낸 표
균사체접종량(㎠/10㎖) 1.2 2.4 3.6
보존온도(℃) 무보존 35 무보존 35 무보존 35
탈색율(%) 43.6 22.9 55.2 36.3 48.2 32.2
색 차(ΔE) 29.1 7.5 80.7 19.9 52.3 23.2
※보존기간 : 30일, 반응온도 : 25℃, 배양기간 : 3일, BTB농도 : 100ppm
탈색율(%)=〔(반응전 흡광도-반응후 흡광도)/반응전 흡광도 × 100
색차(ΔE)=√ΔL(백색도변화)2 + Δa(적색도변화)2 + Δb(황색도변화)2

다. 활력검정배지의 배양기간별 탈색율 및 색차

배양기간별 보존온도, 탈색율, 색차를 나타낸 표
배양기간(일) 1 2 3
보존온도(℃) 무보존 35 무보존 35 무보존 35
탈색율(%) 28.6 12.7 36.5 24.2 55.2 36.3
색 차(ΔE) 27.5 22.7 40.6 31.0 80.7 19.9
※보존기간 : 30일, 반응온도 : 25℃, 배양기간 : 3일, 접종량 : 2.4㎠/10㎖
탈색율(%)=〔(반응전 흡광도-반응후 흡광도)/반응전 흡광도 × 100
색차(ΔE)=√ΔL(백색도변화)2 + Δa(적색도변화)2 + Δb(황색도변화)2

적요 :

  • ○ 큰느타리버섯 균사의 효소활성정도를 지시약의 색변화로 쉽게 판별할 수 있는 방법으로 YPL배지에
    지시약 BTB를 100ppm 농도로 첨가하고 균사체는 배지량10㎖당 2.4㎠를 접종하여 25℃에서 3일간 배양하면
    활력검정배지색이 녹색에서 노란색으로 탈색작용이 일어남.
  • ○ 보존하지 않은 균주는 활력검정배지색이 녹색에서 탈색되어 노란색으로 변하나 고온 35℃에서
    30일간 보존한 균주는 녹색의 탈색정도가 약하여 연한녹색으로 변함.
  • ○ 활력검정배지의 녹색에서 노란색으로의 탈색작용은 BTB를 분해하는 효소 (리그린분해효소) 활성이
    높아 균사 활력이 좋으며, 탈색작용이 약하게 일어나 색변화가 거의 일어나지 않은 경우는
    효소활성이 낮아 균사 활력이 저하됨.

개발기술의 활용방법 :
○ 활력검정방법 :

  • – 검정기본배지 : YPL(Yeast extract 0.45%, Peptone 0.75%, Lactose 0.5%)
  • – 첨가지시약 : BTB(Bromothymol Blue) 100ppm
  • – 균사체 접종량 : 2.4㎠/10㎖
  • – 배양기간 : 3일
  • – 배양온도 : 25℃(상온)
  • – 판별법 : 탈색정도 심함 → 보존하지 않은 균주 (활력이 좋음)
    탈색정도 약함 → 고온(35℃)보존균주 (활력이 저하됨)